Определение групп крови с помощью цоликлонов

Страхование

Определение группы крови с помощью цоликлонов алгоритм и интерпретация результатов

Определение группы эритроцитарных антигенов и резус-фактора давно стало одним из обязательных исследований для большинства пациентов, поступающих на стационарное лечение. Его проведение возможно на любом уровне оказания медицинской помощи при условии наличия необходимых реагентов и инструментов.

Обычно, определение группы проводится с помощью стандартных сывороток, хотя, конкуренцию ему составляет еще один метод, сходный по методике проведения с эталонным – использование цоликлонов.

Цоликлон – моноклональное антитело, образующееся путем генной инженерии. Чаще всего, для его получения используют мышей – животному вводят специальный антиген, а после получают асцитную жидкость грызуна, в которой и содержатся указанные антитела.

Морфологически, они относятся к иммуноглобулинам класса М, т.е. антителам острой фазы. Механизм действия их обусловлен образованием комплекса антиген-антитело, где в качестве антигена выступают некоторые молекулы (в данной ситуации – белки, определяющие группу крови и ее резус), расположенные на мембране клетки.

Веками ученые пытались узнать о человеческом организме как можно больше и научиться исцелять больных от любой болезни. Одним из важных параметров является определение группы крови цоликлонами.

Медицина выделяет у людей всего четыре группы крови не зависимо от половой или расовой принадлежности.

Иммунологические признаки, которые и составляют основное различие по группе эритроцитарных антигенов, передаются по наследству.

Что такое цоликлон

Определение групп крови с помощью цоликлонов

Определение группы крови с помощью различных лабораторных реагентов стандартный метод исследований. Информация группе крови крайне важна, особенно в тех случаях, когда человеку нужна экстренная помощь.

Перед хирургическим вмешательством обязательно определяется тип индивидуальных антигенных характеристик человека.

Та же процедура является обязательно для военнослужащих (информация указывается на форме), для женщин перед родами и т.д.

Определение групп крови цоликлонами сравнительно новый метод исследования. Этот анализ может проводиться на любом этапе стационарного лечения пациентов.

Для осуществления лабораторного исследования не требуется много времени, достаточно наличие всех необходимых химических веществ (цоликлонов) и простого оборудования.

Цоликлоны по сути являются одним из видов иммуноглобулинов (тип М). Это моноклональные антитела, которые были образованы с помощью генной инженерии. Цоликлоны получены в результате воздействия сыворотки на стерильных лабораторных мышей. Образовывается скопление жидкости в брюшной полости грызуна, которая содержит эти антитела.

Определение групп крови с помощью цоликлонов

Определение групп крови с помощью цоликлонов требует предварительной подготовки и действий согласно установленному алгоритму. Обстановка в помещении, в котором проводится анализ оговорена отдельно.

Температура воздуха должна быть не ниже 15 и не выше 25 градусов, иначе результат исследования не может считаться достоверным. В помещении не должно быть пыли, животных, насекомых и других факторов, которые могут физически повлиять на процесс проведения исследования.

Также проведение лабораторного анализа требует хорошей освещенности помещения.

При использовании цоликлонов важно держать флаконы плотно зарытыми и не допускать пересыхания реагентов, иначе способность антител к активным действиям заметно снижается.

Перед процедурой подготавливается весь необходимый инвентарь.

Если лаборант проводит не только лабораторное исследование, но и забор крови, то необходимо подготовить одноразовые шприцы или вакуумные пробирки, жгут, медицинский спирт, ватные шарики и стерильные салфетки. Также под рукой должны быть инструменты для маркировки биообразов пациентов.

Проведения анализа

В современной лабораторной диагностике используется три вида стандартных цоликлонов для определения группы крови и резус фактора.

Реагент типа «Анти-А» окрашен в красный цвет, также окрашен и флакон, колпачок или этикетка флакона». Тип «Анти-В» окрашивается синим, а «Анти АВ» не помечается цветным маркером.

Производители реагентов выпускают упаковки с цоликлонами 5 или 10 мл. Не допускается использование испорченных или некачественных реагентов.

При наличии видимых дефектов упаковки или появлении хлопьев в жидкости, цоликлон не используют.

  • Для определения группы крови на специально подготовленную пластину, которая оформлена как таблица, наносят цоликлоны различных типов (А, В и АВ). Каждый из них должен быть подписан. Реагент наносится на специально отмеченную область. Каждый тип цоликлона должен наноситься отдельной стерильной пипеткой.
  • Рядом с реагентами помещается по 1 капле крови пациента.
  • Стерильной палочкой реагенты смешивают с биологическим образцом.
  • Уже спустя несколько секунд можно заметить изменения и происходящую реакцию агглютинации. По правилам наблюдение следует вести в течение 3 минут. После этого можно сделать вывод о результатах исследования.
  • Отсутствие какой-либо реакции склеивания во всех образцах означает, что в клетках эритроцитов пациента нет агглютиногена исследуемого типа. Образец крови причисляется к I группе (тип 0).
  • Если эритроцитарные клетки пациента вступили в реакцию с реагентами типа «Анти-а» и «Анти-АВ», то у пациента II группа крови (тип А).
  • Заметная агглютинация образца исследуемой крови с цоликлонами тип «Анти-АВ» и «Анти-В» означает, что пациент обладает III группой крови (тип В).
  • Если кровь пациента вступила в реакцию со всеми химичсекими реагентами, то исследуемый образец принадлежит к IV группе (тип АВ). При определении группы крови с помощью цоликлонов дополнительной проверки не требуется, так как реагенты не содержат добавок, которые могут спровоцировать спонтанную реакцию.

Определение группы крови и резус фактора проводится в лабораторных учреждениях в медицинских учреждениях.

Это достаточно простое исследование, которое дает очень полезную и жизненно важную информацию о человеке.

В будущем информация группы крови и резус фактора позволит быстро оказать помощь и организовать переливание крови после травмы или аварии и может спасти жизнь. Узнать свой номер ГК можно самостоятельно заказав исследование в любой медицинской лаборатории. Полученные данные необходимо внести в карту пациента.

Поделитесь с друзьями в соц.сетях

Определениегруппы крови с помощью стандартныхпарных изогемагглютинирующих сывороток.

Определение групп крови с помощью цоликлонов

1Вступительноеслово: Мыпроводим определение группы крови состандартными сыворотками в процедурномкабинете по назначению врача. На мнешапочка, очки, маска, халат, фартук,перчатки. Руки предварительно обработаныгигиеническим способом.

2Оснащение:

  1. Стандартные сыворотки двух серий

  2. Исследуемая кровь в пробирке

  3. Тарелка для определения группы крови.

  4. Четыре стерильных стеклянных палочки (в стакане, чашке Петри)

  5. Изотонический раствор хлорида натрия (пробирка)

  6. Стерильные пипетки 2 шт.

  7. Ёмкость с 3% раствором хлорамина.

3Проведение манипуляции

  1. Внести по капле (0,1 мл) стандартных сывороток в отдельные лунки.

  2. Внести на тарелку большую каплю крови рядом с лункой 4й группы, на расстоянии не менее 1 см от нее.

  3. Отдельными концами стеклянных палочек внести кровь в сыворотки (соотношение 10:1), смешать

  4. Покачивать тарелку 5 мин, наблюдать агглютинацию.

  5. В лунки, в которых произошла агглютинация добавить физиологический раствор (0,1 мл)

  6. Покачивать тарелку, наблюдать агглютинацию.

Приопределении группы крови со стандартнымисыворотками

  1. Агглютинация не наблюдается ни в одной из лунок – первая группа

  2. Агглютинация наблюдается в первой и третьей лунках – вторая группа

  3. Агглютинация наблюдается в первой и второй лунках – третья группа

  4. Агглютинация наблюдается во всех лунках – вероятно четвертая группа

  • Определяем
    результат с сывороткой четвертой группы
    (аналогично)
  • Форма
    ответа:
  • С сывороткой четвертой
    группы агглютинация не наблюдается –
    четвертая группа
  • С сывороткой четвертой
    группы агглютинация не наблюдается –
    определить группу крови невозможно,
    следует заменить сыворотки.
  • После проведения
    манипуляции все загрязненные кровью
    предметы замачиваем в трехпроцентном
    растворе хлорамина на один час.
  • 4
    Возможные ошибки:
  • Грубые
    ошибки:
  1. Не использование средств защиты медработника.

  2. Повторное использование палочек.

  3. Перенос палочек, контактировавших с кровью над лотком с чистыми палочками.

  4. Не соответствие картины агглютинации заключению о групповой принадлежности.

  5. Не продезинфицированы предметы контактировавшие с кровью

Негрубые ошибки:

  1. Время ожидания агглютинации менее 5 мин.

  2. Не внесен физраствор в лунки, в которых произошла агглютинация.

  3. Удерживание палочек за концы а не за центр.

  1. 5
    Критерии оценивания:
  2. Сдал
    – отсутствие грубых ошибок, наличие не
    более двух не грубых ошибок.
  3. Не
    сдал – наличие грубых ошибок, наличие
    более двух не грубых ошибок.

Присовершении грубой ошибки преподавательможет попросить повторить соответствующийэтап манипуляции. Если ошибка повторяется– не сдал. Допускается не более одногоповторения.

Соседние файлы в предмете [НЕСОРТИРОВАННОЕ]

Рейтинг: 4 408

Цоликлоны – антитела, которые получают благодаря генной инженерии, из крови мышей, полностью стерильных. Такая технология применяется для определения групповой принадлежности крови. Цоликлоны для определения групп крови имеют высокую активность, благодаря чему наступает быстрая реакция склеивания.

Исследование крови необходимо проводить в помещении не выше 25 градусов. Очень важно, чтобы все реагенты были плотно закрыты, так как если цоликлоны высыхают, их активность сильно снижается.

Такое тестирование на определение групп крови очень часто назначают для стационарных больных, достаточно иметь необходимые инструменты и реагенты. Медики проверяют кровь на ее групповую причастность с использованием распространенных сывороток, однако цоликлонам отдают большее предпочтение, так как такой способ является быстрым и эффективным.

Что такое цоликлон

Метод перекрестной реакции и метод цоликлонов

Экспресс-диагностика (первичное определение группы крови и Rh-фактора) не учитывает антигены Келл, не говоря уже про другие системы верификации. Поэтому цоликлоны применяют только для первичного определения группы крови и резус-фактора и при экстренных показаниях трансфузии компонентов крови.

Подробнее о самой редкой группе крови в Мире можно найти здесь.

Определение группы крови и резус-фактора цоликлонами анти-А, анти-В и Анти-D супер является наиболее современным и относительно простым методом. Для определения группы крови используются цоликлоны, т.е. моноклональные антитела.

  • Что требуется для определения группы крови и резус-фактора?
  • Определение группы крови по цоликлонам: как проводят, расшифровка результатовцоликлон анти-А;
  • цоликлон анти-В;
  • цоликлон анти-D;
  • – раствор натрия хлорида 0,9 %; специальный планшет; стерильные палочки.

Нанести цоликлоны анти-А, анти-В на специальный планшет по одной большой капле (0,1 мл), под соответствующими надписями.

Рядом с ними капнуть исследуемую кровь (0,01–0,03 мл) по одной маленькой капле. Перемешать их и наблюдать за наступлением или отсутствием реакции агглютинации в течение 3 мин. При сомнительном результате добавить 1 каплю 0,9% физиологического раствора.

  • если реакция агглютинации наступила с анти-А цоликлоном, то исследуемая кровь относится к группе А (II);
  • если реакция агглютинации наступила с анти-B цоликлоном, то исследуемая кровь относится к группе B (III);
  • если реакция агглютинации не наступила с анти-А и с анти-B цоликлонами, то исследуемая кровь относится к группе 0 (I);
  • если реакция агглютинации наступила с анти-А и с анти-B цоликлонами, то исследуемая кровь относится к группе AB (IV), как показано на рисунке.
Еще по теме  Процедура взыскания ущерба с виновника ДТП в 2020 году

AB (IV)

На планшете смешивают большую каплю (0,1 мл) анти-D цоликлона и маленькую каплю (0,01 мл) исследуемой крови пациента. За наступлением реакции агглютинации или её отсутствием наблюдают в течение 3 мин.

  • если реакция агглютинации наступила с цоликлоном анти-D , то исследуемая кровь относится к резус-положительной (Rh )
  • если реакция агглютинации не наступила с цоликлоном анти-D, то исследуемая кровь относится к резус-отрицательной (Rh—)

AB (IV)Rh-

Другими словами, при смешивании цоликлона Анти-D с резус-положительными эритроцитами наступает реакция агглютинации, а если кровь резус-отрицательная — агглютинация отсутствует (как показано на рисунке — четвертая группа крови резус-отрицательная).

Определение групп крови стандартными изогемагглютинирующими сыворотками — поиск и обнаружение в крови антигенов А и В с помощью реакции агглютинации. Для достижения цели используют:

  • Стандартные изогемагглютинирующие сыворотки групп крови О (I) — бесцветная, А (II) — синяя, В (III) — красная, АВ (IV) — жёлтая.
  • Белые тарелки, маркированные группами крови: 0 (I), А (II), В (III), AB (IV).
  • NaCl 0,9%
  • Стеклянные палочки
  1. Подписать тарелку (Ф.И.О. пациента);
  2. Нанести обозначения двух серий стандартных сывороток I, II и III групп крови в объёме 0,1 мл, образующие два ряда по три капли слева направо: 0 (I), А (II), В (III);
  3. Забрать кровь из вены. Шесть капель исследуемой крови пациента перенести стеклянной палочкой на пластину в шесть точек рядом с каплей стандартной сыворотки и перемешать.

Агглютинация начнется через 30 сек. В те капли, где произошла агглютинация, добавить по одной капле NaCl 0,9% и оценить результат.

Положительная реакция агглютинации может быть пескообразной или лепестковой. При отрицательной реакции капля остаётся равномерно окрашенной в красный цвет. Результаты реакций в каплях с сыворотками одной и той же группы (двух серий) должны совпадать.

Принадлежность исследуемой крови к соответствующей группе определяют по наличию или отсутствию агглютинации при реакции с соответствующими сыворотками после наблюдения в течение 5 мин.

При этом следует отметить, что если сыворотки всех трёх групп дали положительную реакцию, это указывает на то, что испытуемая кровь содержит оба агглютиногена (А и В) и принадлежит к группе AB (IV).

Определение групп крови с помощью цоликлонов

Однако в таких случаях для исключения неспецифической реакции агглютинации необходимо провести дополнительное контрольное исследование испытуемой крови со стандартной изогемагглютинирующей сывороткой группы AB (IV), не содержащей агглютининов. Лишь отсутствие агглютинации в этой капле при наличии агглютинации в каплях, содержащих стандартные сыворотки групп 0 (I), А (II) и В (III), позволяет считать реакцию специфической и отнести исследуемую кровь к группе АВ (IV).

Определение группы крови перекрестным способом — обнаружение наличия или отсутствия в исследуемой крови антигенов А и В с помощью стандартных изогемагглютинирующих сывороток, а также антител α и β с помощью стандартных эритроцитов. Реакцию со стандартными сыворотками проводят описанным выше способом.

Для реакции со стандартными эритроцитами необходимы стандартные эритроциты трёх групп крови: 0 (I), А (II), B (III).

  1. Кровь для исследования берут из вены в пробирку, центрифугируют или оставляют на 30 мин для получения сыворотки.
  2. На маркированную тарелку наносят три больших капли (0,1 мл) сыворотки крови из пробирки, а рядом с ними по одной маленькой капле (0,01 мл) стандартных эритроцитов групп.
  3. Соответствующие капли смешивают стеклянными палочками, планшет покачивают, наблюдают в течение 5 мин, в капли с агглютинацией добавляют NaCl 0,9% и оценивают результат.

Оценивают результаты, полученные со стандартными изогемагглютинирующими сыворотками и стандартными эритроцитами. Особенность результатов реакции со стандартными эритроцитами — эритроциты группы 0 (I) считают контрольными.

Результат перекрёстного способа считают достоверным, если при  реакции со стандартными изогемагглютинирующими сыворотками и со стандартными эритроцитами ответы о группе исследуемой крови совпадают.

Если этого не происходит, обе реакции следует переделать.

Определяют группу с помощью изогемагглютинирующих средств — лабораторных реагентов. Исследование проводится, когда смешивают реагент с нативной кровью, и при добавлении раствора натрия хлорида (0,9%).

В процессе исследования изучается, какие антитела (антигены) имеются у натива, а какие отсутствуют. Таким образом и определяется, какая кровь — 0, А, В или АВ.

планшет для типирования крови

В каждой группе свой набор агглютиногенов (антигенов) и агглютининов (антител):

  • 1 (или нулевая) — на поверхности красных кровяных телец присутствует антитело A и антитело B. При этом полностью отсутствуют антитела в сыворотке. Поэтому реакции агглютинации не происходит.
  • 2 — есть в крови агглютинин B (антитело), агглютиноген (антиген) А.
  • 3 — наличествует антиген В и антитело A.
  • 4 — присутствуют оба белка (2 антитела), и нет ни одного антигена. Она является наименее распространенной — около 8% населения.

Определение группы крови по стандартным сывороткам необходимо для того, чтобы при переливании агглютинация ни привела к летальному исходу того, кто подвергся гемотрансфузии. Реакция агглютинации, т. е. склеивания, происходит тогда, когда при попадании сыворотки на эритроциты натива начинается процесс уничтожения этих телец.

Методом простой реакции группу устанавливают с помощью лабораторной сыворотки. Второй способ — метод перекрестных реакций — делается лаборантом. Для его проведения используют стандартные эритроциты и плазму самого пациента. Ее добывают, когда в процессе центрифугирования тяжелые клетки отделяются от плазмы.

Для проверки понадобится 2 капли сыворотки после центрифугирования и отстоя не менее чем 1, 5 часа. В лабораторную планшетку опускают 2 капли добытого биологического материала и добавляют каплю со стандартными красными кровяными тельцами. В первую каплю плазмы помещают кровяные тельца с агглютиногенами 2 группы, а во вторую пробу — с антигенами третьей.

Метод перекрестной реакции считается контрольным и более достоверным. Реакция с эритроцитами оценивается следующим образом:

  • Агглютинация есть и в 1, и во 2 капле. Это кровь обозначается как 0 или 1.
  • Реакции нет в обеих случаях — это 4.
  • Реакция склеивания там, где добавляли эритроциты второй категории — это 2. И, соответственно, 3 группа, где контрольные эритроциты третьего варианта.

Метод цоликлонов

Группу системы АВО также можно установить и с помощью цоликлонов. Эти реагенты сделаны при помощи достижений генной инженерии из крови лабораторных мышей. Тут используют моноклональные антитела, продуцируемые только из одной антителообразующей клетки.

Определение группы крови

В современной медицине группа крови характеризует набор расположенных на поверхности эритроцитов антигенов, которые определяют их специфичность.

Существует огромное количество таких антигенов (обычно применяется таблица групп крови с разнообразными антигенами), но повсеместно производится определение группы крови с использованием классификации по резус-фактору и системе АВ0.

Определение группы является обязательной процедурой при подготовке к любой операции.

Такой анализ также необходим при поступлении на службу в некоторые контингенты, среди которых военные, работники внутренних органов и силовых структур.

Данное мероприятие проводится из-за повышенного риска возникновения состояния, угрожающего жизни человека, в целях сокращения времени, требуемого для оказания помощи в виде переливания крови.

Суть системы АВ0 состоит в наличии структур антигенов на эритроцитах. В плазме нет соответствующих им типовых антител (гамма-глобулинов). Поэтому для исследования крови можно использовать реакцию «антиген антитело».

Эритроциты склеиваются в момент встречи антигена и антитела. Подобная реакция носит название гемагглютинации. Реакция отображается в виде небольших хлопьев при проведении анализа. Исследование основано на получении изображения агглютинации с сыворотками.

Связываются антигены эритроцитов «А» с антителами «ά», а также «В» с «β» соответственно.

Выделяются следующие группы крови по составу:

  • I (0) – ά, β — поверхность эритроцитов совсем не содержит антигенов,
  • II (А) – β — на поверхности имеется антиген А и антитело β,
  • III (В) – ά — поверхность содержит В с антителом типа ά,
  • IV (АВ) – 00 — поверхность содержит оба антигена, однако не имеет антител.

Проведение исследования

Определение групп крови

Антигены есть у зародыша уже в состоянии эмбриона, а агглютинины (антитела) появляются на первом месяце жизни.

Какие существуют препараты цоликлонов

В настоящее время, в лабораторной диагностике используется 3 типа стандартных цоликлонов – анти-А, анти-В и анти-АВ. Каждый из них вступает в реакцию со специфичным для него антигеном, обуславливая развитие иммунной реакции.

Эти препараты выпускаются в виде ампул или флаконов, содержащих 5 или 10 мл раствора антител. Все они имеют специфическую окраску, по которой и проводится определение каждого типа:

  • анти-А окрашен в красный цвет;
  • анти-В выпускается в виде раствора синего цвета;
  • комбинированный цоликлон анти-АВ (или анти-D) специфической окраски не имеет.

Цоликлон анти-АВ может быть модифицированным и использоваться для определения резус фактора.

Алгоритм исследования достаточно прост, специальной подготовки к исследованию от пациента не требуется.

Определение группы может проводиться в нативной крови как с использованием консерванта, так и без него. Для исследования берут капиллярную кровь из пальца пациента.

Результаты проверки

Обязательно соблюдать условия окружающей среды для получения достоверной информации: анализ проводится в хорошо освещенном помещении с умеренной влажностью и температурой не ниже 20 градусов.

Кроме того, следует удостовериться, что кровь была взята у пациента правильно, а срок годности используемых реагентов еще не истек.

На специальную пластину (или планшетку), на расстоянии друг от друга с помощью специальной пипетки наносят по 1 крупной капле каждого из антител (для удобства, лучше располагать их так – А, В, АВ). Возле каждой из капель цоликлонов необходимо поместить по одной капле исследуемой крови и при покачивании планшетки постепенно их перемешать.

Визуально, результаты исследования можно определить уже через 5-10 секунд после начала анализа. В исследуемой крови обнаруживаются так называемые “красные конгломераты” – склеившиеся эритроциты. Образуются они в результате реакции агглютинации, т.е. в том случае, когда цоликлон соответствует антигену (в том числе и при исследовании на резус-фактор).

Как проводится оценка результатов исследования и определение групповой принадлежности?

Как уже говорилось выше, результат исследования определяется по наличию реакции агглютинации визуально или с помощью анализаторов:

  • если ее нет ни в одной из капель, значит исследуемая кровь имеет первую группу.
  • когда она наблюдается в ячейке, где расположен цоликлон анти-А, значит в исследуемой крови содержится данный антиген. Таким образом, исследуемая кровь может быть как второй (генотип АА или А0) или 4 (АВ) групп.
  • если агглютинация наблюдается с цоликлоном анти-В, то исследуемая кровь 3 (ВВ, В0) или 4 группы.
Еще по теме  Штраф за несвоевременную регистрацию автомобиля как избежать постановка авто на учет сроки и штрафы

Для проверки правильности результатов на планшетке и добавляется цоликлон анти-АВ (обладающий свойством определять и резус-фактор). Он, в какой-то мере является контрольным, так как именно по наличию в нем агглютинатов судят о правильности проведенного анализа. Если реакция произошла во всех ячейках, значит исследуемый образец относится к 4 группе крови.

Возможна ситуация, когда агглютинация наблюдается с цоликлоном анти-АВ, а в других образцах ее нет. В таком случае можно говорить о неправильно проведенном анализе, и проводят повторное определение группы и резус-фактора.

Определение группы крови: цоликлоны, стандартные сыворотки и перекрестный способ

Сыворотки для определения группы крови производят в лабораторных условиях из плазмы человека-донора. Занимаются изготовлением этих реагентов в пунктах переливания. Пробы хранятся и перевозятся в герметических колбах при определенной температуре. В сыворотке для определения группы содержатся α- и β-гемагглютинины. На колбе указано, каковы концентрация этих белков, срок и температура хранения.

Проведение исследования

Исследование проводят 2 раза. Сначала простым способом, сразу после забора, затем методом перекрестной реакции в дезинфицированной лаборатории. Есть несколько условий проведения реакции. Узнать группу крови с помощью стандартных сывороток возможно при условии, что срок их годности не истек, а титр (концентрация) реагента будет 1:32 и выше. Важно соблюдение температуры в помещении 15… 25ºС .

Уделите время для прохождения онлайн тестов:
  1. На тарелке и пластиковом планшете подписывают номера групп возле углублений.
  2. Пробы каждой сыворотки помещают в отведенные углубления в планшете (по 1 или 2 капли).
  3. Пипеткой отмеряют по капле крови самого пациента, располагают их рядом с сыворотками и несколько раз размешивают.
  4. В каждую пробу капают изотонический раствор натрия хлорида.
  5. Дополнительно используют сыворотку АВ.

По истечении 5 минут видны результаты. Для точности выполняют анализ с реагентами 2 разных серий выпуска. Бывает, что реакция агглютинизации плохая, тогда ее наблюдают через микроскоп.

Обязательно во время проверки исследуют и то, какой резус-фактор — положительный или отрицательный. Резус — это белок, который у большого процента населения присутствует на поверхности эритроцитов. Если он есть, резус положительный. Если белок отсутствует, это фиксируется. Резус-фактор определяется с помощью плазмы и особой анти-Д-сыворотки.

Проверяется наличие резуса таким же образом, как и при определении разряда системы АВО — наблюдая за реакцией склеивания.

Определение группы крови цоликлонами может проводиться в нативной крови с добавлением консерванта или без него, а также при исследовании капиллярной крови, взятой из пальца. Непосредственно определение группы проводится на специальной пластине или планшете.

В первую очередь, на планшет наносится капля раствора цоликлона под соответствующей пометкой. Рядом с раствором цоликлона наносится капля исследуемой крови, и они смешиваются между собой.

Определение группы крови цоликлонами проводится при равномерном покачивании пластины из стороны в сторону. Визуально, наблюдается агглютинация эритроцитов (слипание их между собой).

Если результат отрицательный, агглютинации не происходит.

В некоторых учреждениях с целью контроля за препаратами обязательно следует зафиксировать время открытия средства и срок его годности. Рекомендуется документально отразить срок годности реагента, если проводится определение группы крови цоликлонами. Фото используемых флаконов делают редко, однако подобная фиксация также возможна.

Определение группы крови по стандартным сывороткам: с помощью, и резус фактора, методом

К минусам можно отнести неточность, при получении сведений. Это происходит при допущении ошибок, которые могут испортить результат:

  • отсутствие специальной одежды, перчаток;
  • не стерильность палочек, оборудования;
  • малое время ожидания;
  • отсутствие физраствора в отсеках.

Плюсом методики считают достоверность. Метод точен на более чем 95%. Простота проведения – смешивание компонентов, требует минимум знаний и оборудования. Еще одно преимущество — доступность всех ингредиентов. Способ позволяет быстро определить группу и резус-фактор. Время агглютинации составляет всего 2,5 минуты. И столько же длится определение и запись результата.

Материал для проведения исследования подходит любой. Это может быть венозная кровь или из пальца. По времени и типу хранения — законсервированная, замороженная или взята в момент самого анализа.

Какие же есть разновидности цоликлональных препаратов?

Выделяют эритротест-цоликлон анти-D (есть три разновидности – супер, вызывающая прямую агглютинацию, просто анти-D-цоликлон, при добавлении которого развивается непрямая агглютинация, и анти-D-микс препарат, имеющий в своем составе компоненты первых двух). Они позволяют не только определить группу крови цоликлонами, но и выявить резус-принадлежность.

Другие растворы отличаются сугубо по названию, так как входящие в них антитела – иммуноглобулины классов М и G позволяют только типировать кровь по стандартным, АВ0, антигенам. Различие между ними заключается только в механизме слипания эритроцитов (прямая или непрямая агглютинация).

Каждый из данных препаратов имеет срок годности и особенности использования. Однако наибольшее распространение в клинической лабораторной диагностике получили только три препарата, указанные выше (анти-А, анти –В, анти-D).

Цоликлоны для типирования групп крови

  • Антитела А – красного цвета.
  • Антитела В – синего цвета.
  • Антиген АВ – обесцвечен.

Последний антиген из списка используется для определения резус – фактора крови.

В арсенале лаборантов есть несколько способов определения. Они основаны на использовании реагентов. Одним из вариантов является техника определения группы крови с помощью цоликлонов. Это специальные тела, относящиеся к иммуноглобулинам.

Добываются из эритроцитов подопытных крыс. Цоликлоны вступают в реакцию с клетками исследуемого образца – агглютиногенами. Каждая группа имеет свой уникальный набор агглютиногенов. По взаимодействию их с цоликлонами могут определить необходимую информацию.

Под агглютинацией понимают процесс склеивания клеток антител и сыворотки и выпадение осадка. Можно еще назвать процесс сворачиванием.

После проведения теста уже можно узнать, какая же группа крови у пациента.

Каковы же результаты исследования, если проводилось определение группы крови цоликлонами? Таблица сопоставления цоликлона и группы крови позволяет разобраться в полученных результатах.

цоликлон 1. I(Rh ) 2. I(Rh-) 3. II(Rh ) 4. II(Rh-) 5. III(Rh ) 6. III(Rh-) 7. IV(Rh ) 8. IV(Rh-)
Анти-А
Анти-В
Анти-D

Как видно из таблицы, если агглютинация произошла в ячейке пластины под номером 3 или 4, значит, кровь второй группы (агглютинация осуществилась за счет взаимодействия антигена А, расположенного на мембране эритроцита, и специального антитела, присутствующего в растворе анти-А-цоликлона). Соответственно, если агглютинация наблюдается в ячейке номер 5 или 6, то и группа крови – третья.

Возможно, что агглютинация происходит во всех лунках. Обычно, это говорит о некачественном препарате либо нарушении правил проведения исследования.

Определение группы крови цоликлонами получает все большее распространение. Если раньше данная процедура проводилась только в специализированных стационарах (например, сугубо в отделениях хирургии и гематологии), то сейчас данная процедура доступна практически в любой оборудованной лаборатории.

Данная методика начинает распространяться и в поликлинической сети для экспресс-определения группы крови и скорейшего выставления диагноза пациенту.

Многие центры частной медицины и косметологии предлагают проведение данной услуги на платной основе. Бесплатно процедура, как уже было сказано, проводится при наличии направления терапевта.

Если нет возможности обратиться в поликлинику, то как определить группу крови по цоликлонам? При наличии дома специальной планшетки и набора препаратов, исследование можно проводить и самостоятельно, помня, однако, о необходимости соблюдения условий процедуры и особенно – стерильности.

Для проведения процедуры необходима хорошо освещенная лаборатория. Помещение должно быть защищено от насекомых, пыли, грязи, волос. Надо поддерживать температуру в пределах 15 25. Внимательно следят за влажностью.

О необходимой влажности можно прочитать в инструкции на упаковке цоликлонов. В таких условиях анализ получится более достоверным. Обязательно наличие чистой медицинской одежды, специальных перчаток и головного убора.

Применяемые инструменты, чтобы определить группу крови:

  • цоликлоны антиА и антиВ;
  • материал для исследования;
  • планшет для анализа;
  • стеклянные палочки (стерильные);
  • раствор натрия хлорида;
  • пипетка, стерильная;
  • посуда или миска с раствором хлорамина 3%;

Расшифровка и забор анализа проводится в лаборатории. Для определения группы крови алгоритм действий следующий. Надо налить цоликлоны по 1 капле в отсеки на планшете.

Внести пипеткой капли крови рядом, избегая контакта пипетки и образца. Стеклянными палочками перемешать цоликлоны и кровь. Смешивать субстанции надо покачивая из стороны в сторону, аккуратно.

Наблюдать реакцию можно через 2,5 минуты.

Далее вносят пипеткой в отсеки, где произошла агглютинация по 1 капле раствора натрия. Смешивают также, покачивая. После чего наблюдают изменения.

Определение группы крови и резус-фактора играет основополагающую роль в случаях, когда речь идет о спасении жизни человека.

Именно по этой причине подобное исследование проводят всем пациентам в предоперационный период, беременным женщинам перед родами и во многих других ситуациях, которые могут потребовать срочного переливания.

Определение группы крови по стандартным сывороткам: с помощью, и резус фактора, методом

Существует несколько способов определения группы крови с использованием разных лабораторных реагентов, и один из них основывается на применении химических веществ под названием цоликлоны. Что же представляет собой определение группы крови цоликлонами и как проводится процедура?

Группа и резус-фактор – генетически обусловленные характеристики крови, которые наследуются от родителей и остаются неизменными на протяжении всей жизни человека. Классификация групп крови осуществляется, исходя из определенного набора биохимических параметров и состава антигенов, и насчитывает 4 основных группы.

  • Переливание пациенту крови несовместимой группы или с другим резус-фактором несет с собой смертельную опасность – иммунная система начинает вырабатывать антитела против чужеродных клеток, которые атакуют и разрушают их.
  • Именно по этой причине в ситуациях, которые несут с собой риск обширной кровопотери, необходимо точное определение принадлежности крови и резус-фактора как у донора, так и у реципиента.
  • Таблица групп крови и резус-факторов
  • Цоликлоны – это антитела, которые получают посредством технологий генной инженерии.
  • Обычно для получения цоликлонов берутся лабораторные мыши – животным вводится специальный препарат, после чего производят забор жидкости из брюшной полости – именно она и содержит необходимые для проведения анализа вещества.
  • С научной точки зрения, цилоклоны можно отнести к иммуноглобулинам М, которые способны реагировать с агглютиногенами – специфическими клетками, присутствующими на поверхности красных кровяных телец.
  • Цоликлоны

Определение группы крови: цоликлоны, стандартные сыворотки и перекрестный способ

Метод цоликлонов

  1. Кровь для исследования берут из вены в пробирку, центрифугируют или оставляют на 30 мин для получения сыворотки.
  2. На маркированную тарелку наносят три больших капли (0,1 мл) сыворотки крови из пробирки, а рядом с ними по одной маленькой капле (0,01 мл) стандартных эритроцитов групп.
  3. Соответствующие капли смешивают стеклянными палочками, планшет покачивают, наблюдают в течение 5 мин, в капли с агглютинацией добавляют NaCl 0,9% и оценивают результат.
Еще по теме  Страховка в Германию: узнать сколько стоит медицинский полис для визы и купить страховку — сделать туристическую страховку для путешествий в Германию

Определение группы крови и резус фактора

Практически сразу после рождения у ребенка берется анализ крови на группу крови и резус-фактор. Эти данные остаются неизменными на всю жизнь. Однако не всегда родители запоминают группу крови и резус малыша.

Следовательно, не могут их сообщить, когда ребенок повзрослеет. Поэтому многие люди самостоятельно сдают анализ на группу крови и Rh. Современная медицина предлагает несколько методов определения группы крови и резус-фактора.

Вот самые популярные из них.

Узнать группу крови можно с помощью цоликлонов. Этот довольно новый метод позволяет получить практически 100% достоверный результат.

Цоликлонами называются моноклинальные антитела, которые синтезированы благодаря разработкам генной инженерии из жидкой ткани стерильных мышей. Они используются для того, чтобы выявить, какая группа у крови по системе АВО.

Такой вид анализа выполняется в условиях лаборатории. Для получения достоверного результата во время исследования должны быть соблюдены ряд правил. Прежде всего, температура воздуха в помещении, где проводятся анализы, не должна быть ниже 15 градусов по Цельсию и выше 25 градусов по Цельсию.

Также в лаборатории должно быть хорошее освещение. Для выполнения анализа используются только качественные реагенты. Они не должны иметь замутнения и содержать хлопья. Для каждого реагента должна быть применена отдельная пипетка, чтобы не допустить смешивание.

Алгоритм действия в данном случае будет следующим. На двух противоположных сторонах тарелки выполняются надписи анти-А и анти-В, под которые лаборант помещает по 0,1 мл соответствующего цоликлона. Определить их можно по оттенку.

Так, у цоликлона анти-А он желто-розовый, а анти-В – синий. Далее, под реагент помещается капля крови. С помощью стеклянной палочки обе субстанции смешиваются.

После этого берется чистая палочка, и такая манипуляция выполняется с двумя другими субстанциями.

Если же процесса агглютинации нет, то цоликлон приобретает красный цвет. После этого происходит определение группы крови:

  • Если агглютинация не идет ни с одной, ни с другой стороны тарелки, то в эритроцитах нет антигенов А и В, следовательно, кровь принадлежит к первой группе.
  • Если агглютинация происходит только там, где присутствовал цоликлон анти-А, то в форменных клетках крови (эритроцитах) присутствует лишь антиген А. Следовательно, кровь принадлежит второй группе.
  • Если агглютинация происходит только там, где присутствовал цоликлон анти-В, то в форменных клетках крови (эритроцитах) присутствует лишь антиген В. Следовательно, кровь принадлежит к третьей группе.
  • Если процесс агглютинации идет в обоих случаях, то в эритроцитах есть антигены А и В. В такой ситуации рекомендуется сделать дополнительный анализ. Для его проведения берется капля крови пациента и смешивается с изотоническим раствором хлорида натрия в количестве 0,1 мл. Если при этом агглютинация не наблюдается, то определяют четвертую группу крови.

Данным методом можно также определить резус-фактор. Алгоритм будет таким же, как и при определении группы крови.

На белую тарелку помещается цоликлон анти-D, а рядом с ним капля крови пациента. Она должна быть в 10 раз меньше реагента. Обе субстанции смешиваются и в том случае, если агглютинация началась, то определяется положительный резус-фактор, в том случае, если нет, то резус-фактор отрицательный.

Как определить группу крови по системе АВО? Методика распознания группы крови и резус-фактора по системе АВО не менее популярна, чем предыдущая. Исследование также проводится в лабораторных условиях. Техника выполнения анализа по системе АВО проста.

К ним добавляются капли крови, размеров раз в 10 меньше. Затем, субстанции смешиваются, и наблюдается реакция. Спустя 5 минут, лаборант может начать расшифровку. Оценивается агглютинация, при которой возникают хлопья, а сыворотка становится бесцветной.

Метод АВО выдает такие результаты:

  • агглютинации нет нигде, следовательно, у человека первая группа крови;
  • агглютинация идет в сыворотках О и В, значит, кровь 2 группы;
  • агглютинация идет в сыворотках О и А, значит, кровь 3 группы;
  • агглютинация идет во всех сыворотках АВО, значит, требуется дополнительное исследование, в котором будет задействована сыворотка для определения четвертой группы. Если в данном случае процесс агглютинации не состоялся, значит, исследуемая кровь относится к 4 группе.

Levine и Stetson обнаружили антигены системы Резус в 1939 году. Ученые изучали причины развития гемолитических реакций у рожениц при трансфузиях женщинам идентичных по системам AB0, MN и P. эритроцитов мужей. Годом позже Landsteiner и Wiener продуцировали выработку антител посредством иммунизации кроликов эритроцитами обезьян макака-резус.

Антитела получили название анти-RH антитела. Полученные агглютинины вступали в реакцию агглютинации с эритроцитами макак-резус и с эритроцитами 85 % граждан Нью-Йорка белой расы. Вызвавший образование антител антиген получил название RH-фактор (D-фактор).

Система Резус объединяет 45 антигенов. Агглютиногены передаются по наследству и остаются неизменными на протяжении жизни. Иммуногенность убывает в следующем порядке: D {amp}gt; c {amp}gt; E {amp}gt; C {amp}gt; e. Каждый агглютиноген кодируется одним из двух тесно связанных генов: RHD отвечает за выработку D-антигена, RHCE – за продукцию антигенов Cc и Ee. Резус-положительными донорами считают лиц с антигенами D, C или E на поверхности эритроцитов. При отсутствии вышеперечисленных агглютиногенов доноров считают резус-отрицательными.

В редких случаях эритроциты людей не содержат ни одного антигена резус. Фенотип обозначают Rhnull. Ген Xro в этом случае представлен в гомозиготной форме и подавляет продуцирование всех антигенов. Обладатели фенотипа Rhnull не проявляют агглютиногеной активности, но имеют возможность передавать антигены по наследству.

Среди европейцев частота резус-положительных по антигену D лиц составляет 85 %. На мембране красных кровяных телец обычно расположено около 10 000 – 30 000 молекул D. При этом существуют два особых типа D-положительных лиц: Du (слабый) и Dpartial (частичный). Иммунная система Du и Dpartial способна вырабатывать анти-D-антитела.

Определение группы крови по стандартным сывороткам: с помощью, и резус фактора, методом

Слабый антиген встречается у 1,5 % резус-положительных лиц и характеризуется низким числом (100 – 500) молекул D на мембране. Является иммуногенным для резус-отрицательных лиц. При этом переливание D-положительных эритроцитов больным со слабым D может вызвать сенсибилизацию кровяных телец донора.

Эритроциты с Du слабо агглютинируются или совсем не вступают в прямую реакцию агглютинации с полными анти-резус антителами. Определение резус-принадлежности производят в непрямом антиглобулиновом тесте. Носителей Du считают резус-положительными донорами и резус-отрицательными реципиентами.

обладатели данной категории продуцируют антитела к неизмененному антигену и к частичным антигенам DI – DV, DVII. Техника определения резус-фактора DVI заключается в последовательном применении двух диагностикумов: моноклональных IgM анти-D-антител (цоликлона Анти-D-Супер или Анти-D IgM) и поликлональных или моноклональных IgG антител анти-D (стандартного универсального реагента или цоликлона Анти-D).

Отрицательный результат реакции на первом и положительный результат на втором этапе исследования свидетельствует об обнаружении DVI. Обычно категории DVI соответствует генотип CcDee. Беременным женщинам с DVI при вынашивании плода с полным D назначают антирезусный иммуноглобулин.

Антитела против антигенов резус являются иммунными. Возникают вследствие изосенсибилизации. Специфичность определяется спровоцировавшими образование антител антигенами. Выделяют полные и неполные антитела.

Полные являются IgM антителами. Отличаются большим молекулярным весом, обнаруживаются реже по сравнению с неполными антителами. Способны агглютинировать резус-положительные эритроциты. Имеют меньшее значение при трансфузиях.

Определение группы крови по стандартным сывороткам: с помощью, и резус фактора, методом

Неполные преимущественно относятся к классу IgG. Закрепляются на поверхности резус-положительных эритроцитов без образования агглютинатов. Склеивание кровяных телец осуществляется при наличии коллоидных растворов и протеолитических ферментов или после обработки антиглобулиновой сывороткой.

Свыше 90 % осложнений при гемотрансфузиях обусловлено несовместимостью донора и реципиента по антигену Rho(D). Большое значение также имеет антиген hr’(c). Агглютиноген присутствует у 80 – 82 % населения. Оставшиеся 18 – 20 % лиц попадают в группу повышенного риска ввиду высокой вероятности несовместимости по hr’(c) с донорами и развития посттрансфузионных осложнений.

Цоликлон Анти-D-Супер — это полные анти-D IgM антитела человека. Для получения достоверных результатов анализируемый образец должен содержать достаточное количество эритроцитов.

  1. Обеспечьте хорошее освещение и комнатную температуру воздуха в помещении.
  2. Поместите одну большую каплю (приблизительно 0,1 мл) Анти-D IgM на пластину.
  3. Рядом расположите одну маленькую каплю (примерно 0,03 мл) исследуемых эритроцитов.
  4. Перемешайте две капли стерильной палочкой.
  5. Спустя 10 – 15 секунд плавно покачивайте пластинку на протяжении 20 – 30 секунд.
  6. Проверьте наличие агглютинации спустя три минуты после перемешивания.

В случае наступления реакции кровь оценивается как резус-положительная (Rh ), при отсутствии реакции – как резус-отрицательная (Rh-). При отрицательной либо слабо выраженной агглютинации необходимо повторно провести исследование с неполными анти-D IgG антителами с целью выявления слабого или частичного антигена D.

результат реакции
визуальная оценка результатов реакции в проходящем свете
регистрация результатов анализа

Параллельно с анализом выполняют постановку трех контрольных проб: реагента цоликлон Анти-D (анти-D IgG) со стандартными резус-положительными и резус-отрицательными эритроцитами, анализируемых эритроцитов с раствором желатина без диагностикума анти-D IgG.

  1. Поместите в пробирку 0,05 – 0,1 мл (одну каплю) эритроцитов из сгустка свернувшейся крови или отмытых от консерванта.
  2. Добавьте 0,1 мл (две капли) подогретого до разжижения при 45 – 50 °C 10 % желатина.
  3. Добавьте одну каплю цоликлона Анти-D (анти-D IgG).
  4. Выполните перемешивание.
  5. Инкубируйте пробирку на водяной бане 10 – 15 минут или в термостате при 48 °C на протяжении получаса.
  6. Добавьте 5 – 6 мл изотонического раствора.
  7. Переверните пробирку 1 – 2 раза.
  8. Оцените наличие агглютинации в проходящем свете.
  • Определение группы крови и резус-фактора
  • Алгоритм действий при определении группы крови и резус-фактора при поступлении женщины в родильный дом
  • Определение группы крови системы АВ0 моноклональными антителами
  • Подготовить:
  • сухое предметное стекло (типовую тарелочку) для определения группы крови;
  • цоликлоны анти-А (розового цвета) и анти-В (синего цвета);
  • две пипетки для взятия цоликлонов из флаконов;
  • две стеклянные палочки для смешивания крови пациентки с цоликлонами;
  • одноразовый шприц (на 5-10 мл) с иглой для взятия крови из вены пациентки;
  • в стерильный лоток положить 3 шарика, смоченных спиртом, 2-3 стерильные салфетки;
  • резиновый жгут для внутривенных пункций;
  • сухую центрифужную пробирку, на которой стеклографом отчетливо подписать фамилию пациентки;
  • бланк – направление в лабораторию, где врачом – лаборантом повторно определяется группа крови, резус принадлежность, ставится печать и подпись
Оцените статью
Автострахование Онлайн
Добавить комментарий

Нажимая на кнопку "Отправить комментарий", я даю согласие на обработку персональных данных и принимаю политику конфиденциальности.